关于微生物论文范文参考文献,与西维尔微生物限度检查方法的相关论文格式

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　　[摘 要]为了保证产品检查的真实性和重现性,近年来,随着药厂GMP认证的开展,药品的生产管理,由传统的产品质量控制从出厂前检验,发展到验证确立控制生产过程的运行标准,通过对已验证的状态的监控,控制整个工艺过程,确保质量的验证质量体系.本文主要对西维尔按照2005版药典的要求进行微生物限度法验证实验,从而找出适合它的微生物检查方法.

　　[关 键 词]西维尔,菌种,培养基

　　[中图分类号]R927

　　[文献标识码]B

　　[文章编号]1006-1959(2009)12-0254-02

　　1材料与方法

　　1.1试验样品:药品名称:西维尔(硒酵母片).

　　1.2验证试验的设施、设备、灭菌、器具和材料:在局部洁净度100级的单向流空气区域内进行,其环境的洁净度为10000级.检验全过程必须严格遵守无菌操作防止再污染.实验前30min需开紫外灯对实验室灭菌,同时开启超净工作台.平皿规格为直径9cm的培养皿,恒温培养箱,稀释用容器为250ml的三角烧瓶,量器为100ml的量筒.培养基及稀释液均用高压灭菌锅在121℃30min的度条件下进行灭菌进入实验室时需用紫外灯照射30min从传递窗送入,其他仪器用恒温干燥箱160℃2个小时进行灭菌,然后送入实验室.实验人员进入实验室要穿经灭菌的专用无菌服.

　　1.3验证用菌种:枯草杆菌CMCC(B)63501、金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003、大肠埃希菌CMCC(B)44102(均为中国医学微生物菌种保藏管理中心保藏).

　　1.4培养基

　　1.4.1营养肉汤培养基:胨10g,肉浸液1000ml,氯化钠5g,(以上药品均由牡丹江市药品检验所提供)取胨和氯化钠加入肉浸液内,微温溶解后,使用酸度计调节pH为弱碱性,煮沸,滤清,调节pH值使灭菌后为7.2±0.2(灭菌后pH会下降),分装,灭菌.

　　1.4.2营养琼脂培养基:照上述营养肉汤培养基的配方及制法,加入15～20g琼脂,调节pH值使灭菌后为7.2±0.2,分装,灭菌[1].

　　1.5稀释剂:pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲溶液,1%无菌氯化钠缓冲溶液.

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　　1.6《中国药典》有关微生物限度检查法方法验证试验.

　　1.6.1菌液制备:试验菌菌液制备:将菌液采用10倍稀释法确定试验用稀释度(细菌数约为50～100cfu/ml)[2],经37℃培养18～24h,金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌(由于条件问题还有2个菌种无法进行试验白色念珠菌和黑曲霉)的肉汤培养物1ml+9ml7%无菌氯化钠缓冲溶液,10倍稀释至10-5～10-7,做活菌计数备用,然后进行平皿培养,根据生长的菌数来确定其稀释度(细菌数约为50～100cfu/ml).

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　　供试液制备:在超净工作台上,先将药瓶和表面的锡箔用酒精70%消毒,然后在已消毒的托盘天平上称量10g西维尔加入已灭菌的研钵研磨均匀,用已灭菌的100ml量筒称取无菌pH7.0的无菌氯化钠蛋白胨缓冲液90ml分几次加入研钵,再转到250ml三角瓶得到浓度为1∶10供试液[3].

　　1.6.2常规法(平皿法):首先用无菌的1ml移液管吸取供试液1ml加入直径为9cm的平皿中,做一组平行样(重复操作一次),然后加入15～20ml营养琼脂培养基,混匀,待凝固后,置规定温度(30℃～35℃)培养24～48h观察结果细菌计数.

　　1.6.3培养基稀释法:本试验采用稀释法来中和西维尔的抑菌性.用已灭菌的1ml移液管加0.5ml/皿供试液,再加15～20ml琼脂培养基,混匀,待凝固后,置规定温度(30℃～35℃)培养24～48h观察结果细菌计数,测定回收率.

　　2结果

　　西维尔微生物限度检查方法的常规法和培养基稀释法的检查方法验证结果见表1、表2.

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　　3讨论

　　试验组、稀释剂对照组的微生物生长数量相似,表明中和剂具有足够的中和效力,稀释剂对照组与菌液组的微生物生长数量相似,表明样品与处理用中和剂的毒性、检测程序和培养条件等均不会影响微生物的生长.本实验表明,西维尔药品中存在一定的抑菌成份,主要是药品中含有硒,硒具一定的抑菌作用,在该实验条件下,采用培养基稀释法可有效的消除其抑菌作用.

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